细胞凋亡检测全指南：从原理到方法选择｜附全流程避坑方案

标题 ：细胞凋亡检测全指南：从原理到方法选择｜附全流程避坑方案  

细胞凋亡检测结果不准？本文解析早期/晚期凋亡标志物，对比流式/荧光/WB/电镜6大技术优劣，提供Annexin V、JC-1、Caspase-3等核心指标操作技巧！

 一、凋亡检测为什么总失败？三大核心痛点  

1. 假阳性高：坏死细胞混杂（未区分PI+/Annexin V+）  

2. 漏检早期凋亡：仅检测晚期指标（如DNA断裂）  

3. 方法选错：  

   > ❌ 组织切片用流式 → 样本报废  

   > ❌ 高通量筛选用电镜 → 效率崩盘  

 二、6大检测方法全解析（附黄金选择策略）  

 1. 流式细胞术（金标准）  

> ✅ 适用场景：悬浮细胞、高通量分析（5min/样本）  

 2. 荧光显微镜（形态学s选）  

- Hoechst 33342：染色质固缩（蓝光）  

- TUNEL：DNA断裂标记（绿光）  

  3. Western Blot（分子机制验证）  

- 必检指标：  

  - Cleaved Caspase-3（17/19kDa）  

  - PARP切割（89kDa）  

  - Bax/Bcl-2比值  

- 避雷：避免使用β-actin做内参（凋亡时降解）  

 4. 电镜（验证）  

- 典型特征：染色质边集、细胞器完整  

- 致命缺点：耗时＞3天，成本￥500+/样本  

 5. 酶标仪高通量法  

- Caspase-Glo®试剂：发光值反映酶活性  

- 适用：96/384孔板药物筛选  

 6. 彗星电泳（DNA损伤专属）  

- “彗星尾”长度 = DNA碎片量  

- 灵敏度：可检单细胞损伤  

 三、方法选择决策树（拯救选择困难）  

 四、凋亡检测全流程避坑手册  

1. 样本制备：  

   - 禁止胰酶消化（诱发假凋亡）→ 用细胞刮收集贴壁细胞  

2. 染色时机：  

   - 药物处理后24h内检测（防自发坏死干扰）  

3. 对照设置：  

五、顶级试剂盒性能对比  

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